免费大片黄在线观看,国产精品偷伦视频观看免费,四虎成人精品永久网站,粉嫩大学生无套内射无码卡视频

一種新型血小板聚集儀性能評價

及幾種血小板分析儀的比較研究

任軍偉 關杰 朱遠 白潔 叢玉隆 *

（解放軍總醫(yī)院西院檢驗科，北京 100853 ； * 通訊作者，北京 100853 ）

摘要 ： 目的 通過新型 PL-11 血小板分析儀（結果用最大聚集率， maximum aggregation rate , 以 PL-MAR% 表示）與光比濁法血小板聚集儀（ light transmittance aggregometry, LTA ） ，結果用血小板最大聚集率以 LTA-MAR % 表示）及 Verifynow 抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)（ VerifyNow ） 結果用血小板抑制百分數 INHI% (in hibition of platelet aggregation percentage ） 表示 ，用（ 100-INHI% ） 表示 Verifynow 血小板聚集率進行比較。 方法 利用二磷酸腺苷（ adenosine phosphate ， ADP ）誘導的 LTA 實驗， ADP 誘導的 PL-11 血小板分析儀實驗， VerifyNow 的 P2Y12 阻斷劑檢測板實驗（ VerifyNow ）同時檢測對照組與單服氯吡格雷患者組（以下用患者組表示）血小板聚集功能。 結果 ① 對照組與患者組對比， LTA-MAR % ， PL-MAR% ， INHI% 3 個參數有統(tǒng)計學差異（分別為 P <0.01 和 P <0.05 ）； ② PL-MAR% ，與（ 100-INHI% ）， LTA-MAR % 呈正相關（ r 分別是 0.794 、 0.889 ）。 結論 : ① 氯吡格雷有抗血小板聚集的藥物效果。 ② PL-11 作為一種新型的血小板分析儀，檢測結果與 LTA 法、 VerifyNow 法結果相關性良好，精密度更高，可作為血小板聚集功能檢測的新方法。

關鍵詞：血小板聚集； PL-11 ；光比濁血小板聚集儀； ADP ； VerifyNow ；

目前我國心血管疾病患者已超過 2.7 億，按全國人口 14 億計算，近 5 個中國人中就有 1 人患心血管疾病。隨著心血管病人抗血小板藥物的廣泛使用，如何更有效、更準確地掌握個體患者的服藥效果，科學地進行個體化治療，就需要有更好的臨床檢驗監(jiān)測手段。 目前，光比濁法血小板聚集儀 （ light transmittance aggregometry, LTA ） 在臨床上的使用率超過 95% ，是臨床應用的最多一種檢測方法 [1] 。 VerifyNow 抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)（ VerifyNow ）近年來在國際上廣泛被研究應用，普遍認為其結果準確、可靠。 南京神州英諾華公司新推出了一種以電阻抗法連續(xù)監(jiān)測血小板數量判斷聚集情況的新型儀器 PL-11 。本文通過 PL-11 與 LTA 及 VerifyNow 在血小板聚集功能方面的平行檢測，達到對 PL-11 檢測性能和方法學的深入了解，使其成為臨床醫(yī)生進行抗血小板藥物藥效監(jiān)測及血小板功能檢測不可多得的新方法，能夠更加準確、有效，快速地服務于患者。

1 材料和方法

1.1 儀器及試劑： CHRONO-LOG MODEL700 血小板聚集分析儀及其配套試劑（美國 CHRONO-LOG 公司）； VerifyNow 抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)（上海新儀儀器有限公司引進），及其配套光路質控板，試劑質控物， P2Y12 阻斷劑檢測板，枸櫞酸鈉真空采血管； PL-11 血小板分析儀及配套試劑（南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司）； Thermo IEC CL40 離心機（美國 Thermo 公司）； SYSMEX XE-2100 血細胞分析儀及其配套試劑（日本 Sysmex 公司）；枸櫞酸鈉抗凝管（美國 BD 公司）。

1.2 觀察對象及標本采集： ① 隨機 選取 17 例健康志愿者， 男性 15 例，女性 2 例；隨機選取單服用氯吡格雷（ 75mg/d ） 10 天以上的心腦血管病患者 10 例（同時未服用其他抗血小板聚集類藥物）。 ② 用 4 支 3.8% 枸櫞酸鈉抗凝真空采血管采集靜脈血： 3 支 3ml ， 1 支 2ml 。 2 支 3ml 樣本進行 LTA 實驗 ； 1 支 3ml 樣本進行英諾華 PL-11 血小板分析儀實驗； 1 支 2ml 樣本進行 VerifyNow P2Y12 阻斷劑檢測板 實驗。

1.3 方法 ： ①光比濁法血小板聚集儀實驗 [2] （ light transmmitance aggregometry ）： 使用 10μmol/L 二磷酸腺苷（ adenosine diphosphate, ADP ）作為誘導劑，用血細胞分析儀測定富血小板血漿（ platelet rich plasma, PRP ） 的血小板濃度，用貧血小板血漿（ platelet poor plasma, PPP ）調整 PRP 血小板濃度為（ 200 ～ 300 ） ×109/L [3] ，檢測 ADP 誘導血小板聚集率。 ② VerifyNowP2Y12 阻斷劑檢測板實驗：先做光路質控，然后取 2ml 的 Verifynow 專用枸櫞酸鈉抗凝真空采血管標本，于 24 ～ 28 ℃ 穩(wěn)定 10min ，上下顛倒混勻 10 次，倒插入分析儀中， 3min 后打印結果； ③ PL-11 血小板分析儀 實驗：將樣本置于儀器的待測試位置，按 “ 檢測 ” 鍵，等待測試完畢，打印結果。

1.4 主要觀察指標： ADP 誘導 LTA 測得血小板最大聚集率（ LTA-MAR % ）； VerifiNow 測得血小板 Inhibition of platelet aggregation percentage (INHI%) ； PL-11 測得最大聚集率（ maximum aggregation rate ， PL-MAR% 。

1.5 統(tǒng)計學分析 ：用 EXCEL2007 整理數據，用 SPSS13.0 軟件包進行 對照組與患者組的配對 t 檢驗以及所有觀察對象 3 種測試方法測得參數的雙變量相關性 分析。 P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對照組與患者組觀察指標（參數）對比 LTA 測得的 LTA-MAR%% ； VerifyNow 測得的 BASE 、 P2Y12 受體的 PRU ， INHI% ； PL-11 測得的 MAR% 。請參見表 1 。

表 1 LTA 、 VerifyNow 、 PL-11 測得對照組與單服氯吡格雷組參數對比（ ± S ）

* 指該參數值不服從正態(tài)分布，使用 Mann-Whitney 兩個獨立樣本非參數檢驗法；其余參數值服從正態(tài)分布，使用配對 t 檢驗。

2.2 所有觀察對象 PL-MAR% ， INHI% ， LTA-MAR %3 個參數雙變量相關性分析 請參見表 2 。

3. 討論

血小板是血栓形成的重要因素，當血小板活化后，其 α 、 γ 及溶酶體等貯存顆粒中的內容物通過開放管道系統(tǒng)（ open canalicular system ， OCS ）發(fā)生釋放反應，顆粒膜蛋白在質膜上高水平表達，引起 CD62p 、 PAC-1 顯著性改變 [4] 。 PAC-1 與血小板表面的 GP Ⅱ b/ Ⅲ a 和血液中的纖維蛋白原（ Fg ）結合 [5] ，在 Ca 2+ 的協助下發(fā)生血小板聚集 [6] 。因此，檢測血小板聚集功能對于早期血栓形成的風險評估，闡明相關疾病的病理機制及臨床選擇正確的治療方案等有重要意義。

光學比濁血小板聚集功能檢測是將 PRP 置于比色杯中，加入誘導劑后，用涂硅小磁粒進行攪拌，血小板逐漸聚集。光探測器接收這一血小板聚集反應體系中連續(xù)變化的光信號，經過轉換，最終將透射光的強度變化通過光強度 - 時間變化曲線描繪出來，就可直接通過圖表觀察到血小板聚集的全過程，以此反映出血小板聚集的速度、程度、血小板解聚等方面的參數和信息 [7] 。 VerifyNow 通過血小板上與 ADP 結合的 P2Y12 和 P2Y 1 兩種受體的不同，加入 前列腺素 E1 （ PGE1 ）抑制 ADP 與 P2Y 1 受體結合，使儀器特異性檢測病人服用噻氯吡啶類（ thienopyridines ）藥物（如氯吡格雷等）后的血小板聚集功能。同時，采用凝血酶受體激活途徑（ Thrombin receptor Activators ）激活血小板聚集，以檢測病人血小板聚集功能的基線 ( 不受 P2Y12 阻斷劑影響的通路 ) ，兩者對比之后得出藥物抑制血小板聚集率 —INHI% 。 PL-11 血小板分析儀是通過在抗凝全血中加入誘聚劑使血小板發(fā)生聚集，儀器均勻選取若干測試點測定非聚全血中的血小板數量，通過與 ADP 誘聚前最開始測得的兩次血小板數量平均值對比得出血小板聚集率，以此反映血小板聚集功能，所測參數有血小板最大聚集率（ MAR% ）、血小板最大聚集點（ MAP% ）、血小板平均聚集率（ AAR% ）、血小板數量、平均血小板體積（ MPV ）、紅細胞數量、平均紅細胞體積（ MCV ） 7 個參數 。

本實驗中，首先，從表 1 結果可以看出健康對照組與患者組相比， LTA-MAR % 、 PL-MAR% 、 INHI% 3 個參數在 2 組之間都有顯著性差異。這說明：①氯吡格雷具有一定的抗血小板聚集功能，只是藥效不強， 原因可能 與其他一些因素有關，如遺傳變異性、患者依從性差、氯吡格雷劑量不足以及 CYP 3A 4 相關的藥物間相互作用等 [8] ； ② PL-11 作為南京神州英諾華醫(yī)療技術有限公司新近上市的新型血小板分析儀，其準確測得對照組與患者組的結果差異，證明其完全可以滿足臨床的檢測需求。 再者， PL-11 測得患者 PL-MAR% 結果是 53.7±6.3 ，與對照組 MAR% 結果 70.1±9.0 相比，約減低 24% ，同時 LTA 測得的 LTA-MAR % 約減低 38% ， VerifyNow 測得的（ 100-INHI% ）約減低 19% ， PL-11 的結果變化率正介于二者中間，說明 PL-11 方法兼具了 LTA 法和 VerifyNow 法的優(yōu)點，或者說 PL-11 方法克服了 LTA 法和 VerifyNow 法的缺點，結果更加符合真實情況。 分析原因：① LTA 使用的是離心血漿，它的檢測狀態(tài)與體內全血的凝集狀態(tài)有較大差異，主要是它去除了紅細胞參與聚集所產生的效果，而紅細胞對于體內血栓的形成是十分重要的；② VerifyNow 雖然也是使用全血測定，但是它以凝血酶作為 聚集基線（ platelet aggregation baseline, BASE ），這本身就不十分科學，因為眾所周知，血小板有許多聚集通路，凝血酶通路并不代表真正的血小板最大聚集能力，我們在實驗中經常發(fā)現 P2Y12 受體的 Reaction Units 值（ PRU ）大于 BASE 的情況出現，而此時儀器給出的 Inhibition of platelet aggregation percentage 即 INHI% 直接為“ 0 ”，事實上 INHI% 是否真正為“ 0 ”，我們不得而知，唯一的辦法就是通過其他的檢測方法重新檢驗。這種情況的發(fā)生恰好證明了凝血酶通路并不代表真正血小板最大聚集能力這個論斷。

從表 2 的結果可以看出 PL-11 測得的 PL-MAR% 與 VerifyNow 測得的 (100-INHI%) 相關性良好（ r=0.794 ），與 LTA 測得的 LTA-MAR % 相關性非常好（ r=0.889 ）。而目前許多人仍認為 LTA 是血小板聚集功能檢測的金標準 [1] 。 VerifyNow 新近在國際上也逐漸被大家所認可，所以， 3 種儀器檢測結果個參數之間的良好相關性充分證明了 PL-11 檢測結果的準確性良好，精密度相對更高。

綜上所述， PL-11 作為一種南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司新型的血小板分析儀，通過對與 LTA 、 VerifyNow 平行測定結果的研究分析，發(fā)現其主要優(yōu)勢在于：①采用 “ 自動連續(xù)檢測 ” 的 方法，直接對血樣中誘聚劑加入后血小板數量、體積的變化進行持續(xù)監(jiān)測，測得聚集前、后血小板數量的變化，計算得出血小板聚集功能水平，與 LTA 、 VerifyNow 依靠光濁度變化間接信息推斷相比，檢測信號更加直接，干擾因素少，不受溶血、脂血、黃疸等標本濁度的影響；②采用抗凝全血作為測試樣本，基本保持與體內血液組成狀態(tài)一致，白細胞、紅細胞參與檢測過程，更符合體內真實的血小板聚集狀 況； ③ PL-11 儀與 LTA 、 VerifyNow 相比，準確性良好，精密度更高 ； ④儀器同時還能提供血小板平均體積（ MPV ）、紅細胞數量、平均紅細胞體積（ MCV ）等參數，一次測定，便可對樣本多個方面分析評價，更加全面，準確。⑤儀器操作簡便、快速、檢測費用低廉。綜合以上幾點，證明 PL-11 完全可以作為臨床上 抗血小板藥物藥效監(jiān)測， 血小板聚集功能檢測的良好方法選擇。

參考文獻

1 Michelson AD. Platelet function testing in cardiovascular diseases[J]. Circulation . 2004; 110: e489–e493.

2 吳濤 , 劉景漢 , 李卉 , 等 . 亞硝基谷胱甘肽對冰凍血小板聚集及一氧化氮 . 中國實驗血液學雜志 ,2012,20:386-389.

3 譚大偉 , 朱平 , 李小鷹 . 氯吡格雷抑制血小板功能的兩種檢測方法比較 : 血小板聚集實驗與血小板膜糖蛋白檢測 . 中國組織工程研究與臨床康復 ,2007,11:2021-2024.

4 徐培敬 , 陳穎 , 胡友東 . 急性腦梗死硫酸氫氯吡格雷治療前后 CD62P 和 CD63 的關系 [j]. 中國誤診學雜志 , 2012, 12 (8):1834:1835.

5 張炘 , 段傳志 , 李鐵林 , 等 . 血小板活化特異性標志物 PAC-1 和 CD62p 與急性腦梗死病情嚴重程度的相關性 [J]. 中國神經精神疾病雜志 , 2011, 37(11):698-671.

6 叢玉隆 , 王丁等 . 當代檢驗分析技術與臨床 [M]. 中國科學技術出版社 . 2002: 106-115

7 鄒雄 , 叢玉隆 , 陳瑜 , 等 . 臨床檢驗儀器 . 北京 : 中國醫(yī)藥科技出版社 , 2010, 110-116.