一種新型血小板聚集檢測(cè)方法及儀器性能評(píng)價(jià)研究
張有濤 趙益明 季順東 趙赟霄 蔣敏 金曉華 史進(jìn)方 顧國(guó)浩 阮長(zhǎng)耿
【摘要】 本研究旨在評(píng)價(jià)對(duì)血小板聚集功能檢測(cè)的新方法及儀器的性能。按照國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ ICSH ）制定的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。用 EDTA-K2 及檸檬酸鈉靜脈抗凝血測(cè)試血小板分析儀的批內(nèi)重復(fù)性、日間重復(fù)性、攜帶污染率、準(zhǔn)確性及線性性能，并與 MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果， 各參數(shù)皆符合 ICSH 的要求。血小板分析儀批內(nèi)、日間精密度的 CV 均 < 5 % ；攜帶污染率 < 1 % ；測(cè)定定值全血質(zhì)控物，準(zhǔn)確性滿意，線性良好；測(cè)定結(jié)果與光 電比濁法 結(jié)果相關(guān)性分析， R 2 = 0.9439 。上述結(jié)果證明：新型血小板分析儀的批內(nèi)重復(fù)性、日間重復(fù)性、攜帶污染率、準(zhǔn)確性、線性及比較實(shí)驗(yàn)均符合要求，報(bào)告結(jié)果準(zhǔn)確可靠。新型血小板分析儀是一種較理想的適用于血栓病早期預(yù)警和診斷的新型血小板聚集功能檢測(cè)儀，值得推廣應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】血小板聚集；血小板分析儀；評(píng)價(jià)
Evaluation Study on a new platelet aggregation analysis method
and the analyzer
ZHANG You-ta o ﹡ , ZHAO Yi-ming, JI Shun-dong, ZHAO Yun-xiao, JIANG Min, JIN Xiao-hua, SHI Jin-fang, GU Guo-hao, RUAN Chang-geng. ﹡
Clinical Laboratory, The First Affiliated Hospital , Soochow University , Suzhou 215006, China Corresponding author: RUAN Chang-geng. Email: changgengruan@hotmail.com
【 Abstract 】 To evaluate and report the performance of the new detection method for studying Platelet aggregation function and its instrument on the basis of the guidelines of International Council for Standardization in Haematology (ICSH), intravenous blood samples anticoagulanted with EDTA-K2 and sodium citrate were detected by the new type of platelet analyzer to evaluate the intra-assay and inter-assay coefficient of variation (CV), carry-over rate, accuracy, linearity of the new type of platelet analyzer. Platelet aggregation rate was detected by the new type of platelet analyzer and MPG-3E multifunctional double channel blood coagulation analyzer, respectively. The correlation of detection data between the new type of platelet analyzer and MPG-3E multifunctional double channel blood coagulation analyzer was examined. As a result, all the parameters meet the standard of ICSH. Both of the intra-assay and inter-assay CV values were less than 5 % ; carry-over rate was less than 1 % ; the accuracy and the linearity was excellent ( r > 0.99). It was concluded that the new type of platelet analyzer is better in intra-assay and inter-assay coefficient of variation (CV), carry-over rate, accuracy, linearity, and comparison test, and its analytical results are accurate and reliable. The new type of platelet analyzer is an ideal platelet function detector for early warning and diagnosis of thromboembolic disease, which is worthy to be extended and applied.
【 Key words 】 platelet aggregation; platelet analyzer; evaluation
血小板參與機(jī)體內(nèi)許多生理、病理過(guò)程 [1] 。測(cè)定血小板生理功能，特別是其聚集性，不僅有助于診斷某些先天性和獲得性血小板缺陷所導(dǎo)致的出血性疾病，且在血栓性疾病發(fā)病機(jī)理、臨床診斷、抗血栓療法、監(jiān)測(cè)抗血小板藥物濃度等研究中有重要意義 [2,3] 。目前，常采用光電比濁法，全血電阻法， PAF100 小板功能儀， Verifynow 系統(tǒng)檢測(cè)血小板聚集功能 [4] 。以上方法存在儀器操作復(fù)雜、影響因素較多，所得結(jié)果重復(fù)性差，正常值范圍寬等缺點(diǎn)。 PL-11 血小板分析儀是國(guó)產(chǎn)的血小板分析儀。它可直接使用全血?jiǎng)討B(tài)分析血小板聚集過(guò)程并能對(duì)血液細(xì)胞的多種組分（包括血小板和紅細(xì)胞）進(jìn)行定量分析。每一測(cè)定分析可提供 10 項(xiàng)有關(guān)參數(shù)，樣品結(jié)果在輸出時(shí)能分別提供血小板數(shù)量變化、血小板體積變化、紅細(xì)胞變化、血小板聚集曲線、血小板分布圖及紅細(xì)胞分布圖等全面的樣本信息。最近，本文對(duì)該儀器進(jìn)行了評(píng)估，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。
材料與方法
儀器 ：（ 1 ） PL-11 血小板分析儀：南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)。（ 2 ） MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀：上海斯隆醫(yī)電設(shè)備有限公司。（ 3 ） 5 ～ 40μl ， 40 ～ 200μl ， 200 ～ 1000μl 微量移液器各一，由芬蘭 Labsystems 公司提供。 B.D EDTA-K2 抗凝真空采血管和 B.D 檸檬酸鈉抗凝真空采血管，由美國(guó) B.D 公司提供。
試劑 ： PL-11 血小板分析儀試劑，全部為南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司配套的稀釋液、溶血?jiǎng)┑仍噭?PLR-06 血小板誘聚集（主要組成成分為腺苷 -5'- 二磷酸二鈉， ADP ）為南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司提供 。
樣品 ：檸檬酸鈉抗凝靜脈血， EDTA-K2 靜脈抗凝血均來(lái)自本院門診體
檢者的空腹靜脈血；標(biāo)準(zhǔn)定值質(zhì)控全血由 COULTER 公司 ( 高值批號(hào) 120202 ，中值批號(hào) 120202 ，低值批號(hào) 120202) 提供。
PL-11 血小板分析儀主要性能評(píng)估方法 ： (1) 批內(nèi)精密度：選取 EDTA-K2 靜脈抗凝血，取高、中、低值各一份，在 PL-11 血小板分析儀上重復(fù)測(cè) 20 次，分別得出 PLT 、 MPV 、 RBC 及 MCV 的 CV % 。（ 2 ）日間精密度：選取 EDTA - K2 靜脈抗凝血，取高、中、低定值全血質(zhì)控物值各一份，在 PL-11 血小板分析儀上的測(cè)定，每天重復(fù)測(cè)兩次，取均值，共 20 天，得出 PLT 、 MPV 、 RBC 及 MCV 的 CV % 。（ 3 ）攜帶污染率：參照 ICSH 推薦的方法 [1] 進(jìn)行。取 EDTA-K2 靜脈抗凝血，選取 1 個(gè)高值和 1 個(gè)低值標(biāo)本，先測(cè)高值標(biāo)本，重測(cè) 3 次，得出 H1 、 H2 、 H3 ；隨即測(cè)低值標(biāo)本，得出 L1 、 L2 、 L3 。根據(jù)公式：攜帶污染率 = (L1-L3) / (H3-L3)×100 % 。（ 4 ）線性分析：將一高值的 EDTA - K2 靜脈抗凝血，用生理鹽水作 100 % 、 80 % 、 60 % 、 40 % 、 20 % 、 10 % 、 5% 不同濃度的稀釋，測(cè)定各項(xiàng)參數(shù)，使用 EXCEL 軟件計(jì)算測(cè)定值與理論值間的相關(guān)系數(shù)（ r ），要求 r ≥ 0.995 。（ 5 ）準(zhǔn)確性：由 COULTER 提供的高、中、低全血質(zhì)控物，分別連續(xù)測(cè) 3 次，取平均值，再與靶值比較。（ 6 ）血小板聚集對(duì)比試驗(yàn)：取 30 份檸檬酸鈉抗凝靜脈血標(biāo)本，分別用 PL-11 血小板分析儀和 MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀測(cè)定，每份標(biāo)本 2 次測(cè)定間隔時(shí)間不超過(guò) 5min 。結(jié)果進(jìn)行相關(guān)及直線回歸分析。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ：用 EXCEL 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較用直線回歸分析。
結(jié)果
批內(nèi)與日間精密度 ：結(jié)果見(jiàn)表 1 。測(cè)定結(jié)果表明， PL-11 血小板分析儀對(duì)血液細(xì)胞各組分的分類測(cè)定具有很高的精密度，測(cè)定所得的變異系數(shù)達(dá)到廠商設(shè)計(jì)規(guī)定的要求。
攜帶污染率 ：結(jié)果見(jiàn)表 2 。 PL-11 血小板分析儀攜帶污染率實(shí)際測(cè)定值均低于 1% ，完全滿足設(shè)計(jì)規(guī)定的要求。
線性分析 ：各項(xiàng)參數(shù)都隨濃度的稀釋而相應(yīng)減低，相關(guān)系數(shù) ( r ) 均大于 0. 99 ，表 3 結(jié)果表明，評(píng)估選用的線性范圍與 PL-11 血小板分析儀的設(shè)計(jì)要求基本一致，能滿足臨床需求。
準(zhǔn)確性 ：高、 中、 低值全血質(zhì)控物測(cè)得結(jié)果與其靶值見(jiàn)表 4 。
PL-11 血小板分析儀測(cè)定結(jié)果與 MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀測(cè)定結(jié)果相關(guān)性分析： PL-11 血小板分析儀與 MPG-3E 測(cè)定 30 份樣品測(cè)定結(jié)果比較：兩種方法測(cè)定的相關(guān)性很好， R 2 = 0. 9439 。
Table 1 Detection result of precision(CV %)(n = 20)
PLT( × 10 9 /L) MPV(fl) RBC( × 10 12 /L) MCV(fl)
high mid. low high mid. low high mid. low high mid. low |
Batch 1.58 3.27 2.80 0.77 2.1 2.13 0.84 0.65 0.41 0.55 0.45 0.34
precision
Day to 4.89 3.21 4.73 2.93 4.59 3.82 0.89 0.73 0.58 0.76 0.61 0.55
dayprecision |
|
Table 2 Carryover rate
H3 L1 L3 carryover rate （ % ） |
PLT 381 61 59 0.62
RBC 6.81 1.25 1.21 0.71 |
note ： the design of PL-11 platelet analyzer stipulates the carryover rate< 1.5 %
Table 3. Linear analysis
Detection range intercept regression coefficient correlation coefficient （ r ） |
PLT 30 ～ 600 （× 10 9 /L ） 1.209 1.006 0.996
RBC 1.2 ～ 12 （× 10 12 /L ） 0.149 0.988 0.997 |
Table 4. Detection of PL-11precision
PLT( × 10 9 /L) MPV(fl) RBC( × 10 12 /L) MCV(fl)
high mid. low high mid. low high mid. low high mid. low |
Target value 384 152 60 12.45 10.45 7.15 6.85 3.14 1.25 110 92 81
Determing value 375 150 63 12.46 10.47 7.14 6.82 3.12 1.26 111 93 82 |
Fig.1 Correlation analysis of detection results between PL-11 platelet analyzer and MPG-3E multifunctional double channel blood coagulation instrument
討論
血栓形成是血液內(nèi)血小板及多種凝血因子共同作用的結(jié)果。血小板是血栓形成的首要和關(guān)鍵的因素 [2] 。目前，對(duì)一般凝血因子的檢測(cè)方法已十分成熟且廣泛用于臨床，而對(duì)于血小板功能以往的檢測(cè)方法均不理想。因此，臨床無(wú)法對(duì)高危人群及患者的血小板功能進(jìn)行合理評(píng)價(jià)；對(duì)抗血小板藥物治療療效也無(wú)法得到合理評(píng)價(jià)。這或許是當(dāng)今血栓病危害嚴(yán)重的原因之一。測(cè)定血小板生理功能，特別是其聚集性，不僅有助于診斷某些先天性和獲得性血小板缺陷所致出血性疾病，且在血栓性疾病發(fā)病機(jī)理、臨床診斷、抗血栓療法、篩選抗血小板藥物、指導(dǎo)臨床用藥和監(jiān)測(cè)藥物濃度等研究中有重要意義 [2,3] 。
測(cè)定血小板聚集率的方法和儀器種類較多，故不同的方法和不同種類的儀器，測(cè)得的血小板聚集率也不盡相同。光電比濁法是目前應(yīng)用最廣的血小板聚集功能的檢測(cè)方法，但該方法操作繁瑣，必須分離貧血小板血漿、富血小板血漿且溶血、高血脂對(duì)檢測(cè)有明顯干擾，因檢測(cè)是在去除血液主要細(xì)胞成份條件下進(jìn)行，不能完全反映體內(nèi)真實(shí)的血小板聚集功能。血小板聚集機(jī)能的檢測(cè)儀器，目前國(guó)內(nèi)外多采用光電比濁原理設(shè)計(jì)的 [5] ，故而只能用于富血小板血漿的測(cè)定。 MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀是基于此原理設(shè)計(jì)的，功能僅限于血小板聚集性測(cè)定一項(xiàng)。當(dāng)血小板聚集時(shí)，富血小板血漿的透光度增高，通過(guò)光電轉(zhuǎn)換將其信號(hào)在記錄儀中予以描記，故可獲得反映血小板聚集全過(guò)程的聚集曲線。以此可提供反映血小板聚集速度、程度以及血小板解聚等方面的參數(shù)。由于所用儀器檢測(cè)時(shí)必須分離富血小板血漿、貧血小板血漿，操作繁瑣；溶血、高血脂樣對(duì)檢測(cè)有明顯干擾，影響因素較多。而且，檢測(cè)是在去除血液主要細(xì)胞成份條件下進(jìn)行，不能完全反映體內(nèi)真實(shí)的血小板聚集功能。故檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性較差， CV 值達(dá)到 15% ，正常值范圍寬。 PL-11 血小板分析儀是測(cè)定全血中血小板聚集性的儀器，是基于庫(kù)爾特原理的連續(xù)自動(dòng)計(jì)數(shù)檢測(cè)方法 [6] ( 亦稱：電阻法、電脈沖法與電感應(yīng)區(qū)技術(shù) ) 設(shè)計(jì)的。血小板發(fā)生聚集后，二個(gè)或多個(gè)聚集在一塊的血小板復(fù)合體被計(jì)數(shù)為“一個(gè)血小板”或“一個(gè)顆�！�。儀器通過(guò)自動(dòng)連續(xù)檢測(cè)血樣中血小板數(shù)量在加入誘聚劑前、后的變化，并自動(dòng)計(jì)算聚集前、后血小板數(shù)量比值（聚集率），判斷血小板的聚集功能。儀器直接檢測(cè)血小板的聚集行為，不受溶血、黃疸、高血脂等因素影響，因此是對(duì)血小板聚集功能直接的反映。本法直接使用全血?jiǎng)討B(tài)分析血小板聚集過(guò)程，故具有離體后的血液能較快地得到測(cè)定以及避免分離富血小板血漿時(shí)導(dǎo)致的部分血小板丟失及離心過(guò)程對(duì)血小板損傷等優(yōu)點(diǎn)。 PL-11 血小板分析儀依據(jù)直接計(jì)數(shù)血小板數(shù)量的獨(dú)創(chuàng)技術(shù)作為檢測(cè)的基本原理，為血小板功能臨床檢測(cè)提供更方便、有效的手段。
我們對(duì) PL-11 血小板分析儀的精密度、攜帶污染率、線性、準(zhǔn)確性及對(duì)比實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示， PL-11 血小板分析儀的線性好，基本上覆蓋正常及普遍的病理范圍，線性測(cè)定范圍廣；批內(nèi)和日間 CV 值 < 5 % ，在要求范圍內(nèi)，有較好的重復(fù)性；攜帶污染率 < 1 % ，不同標(biāo)本之間交叉污染�。� PL-11 血小板分析儀與 MPG-3E 多功能雙通道血液凝聚儀測(cè)定結(jié)果比較，結(jié)果有較好的相關(guān)性及可比性，而且，測(cè)定結(jié)果精密度更高，變異更小 。 PL-11 血小板分析儀總體設(shè)計(jì)新穎合理，具有良好的技術(shù)性能，檢測(cè)靈敏度較高，操作簡(jiǎn)單，同時(shí)該機(jī)數(shù)據(jù)處理快，提示異常情況，方便檢驗(yàn)人員復(fù)查，是一種值得推廣使用的較理想的新型血小板分析儀。
參考文獻(xiàn)
• Steinhubl SR, Moliterno DJ. The role of the platelet in the pathogenesis of atherothrombosis. Am. J. Cardiovasc. Drugs, 2005; 5: 399-408.
• Furie B, Furie BC. Mechanisms of Thrombus Formation. N. Engl. J. Med., 2008; 359: 938-949.
• Frossard M, Fuchs I, Leitner JM, et al. Platelet function predicts myocardial damage in patients with acute myocardial infarction. Circulation, 2004; 110(11): 1392-1397.
• 叢玉隆主編 . 當(dāng)代血液分析技術(shù)與臨床 . 北京 : 人民衛(wèi)生出版社 , 1997:166-183.
• 包文鑫 , 李家增 , 陳炳獻(xiàn) . 比濁法測(cè)定血小板聚集性 . 中華血液學(xué)雜志 , 1980; 1( 4): 225-228.
• 彭黎明 , 王蘭蘭主編 . 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)自動(dòng)化及臨床應(yīng)用 . 北京 : 人民衛(wèi)生出版社 , 2003: 211-219.
作者單位： 215006 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科（張有濤、蔣敏、金曉華、史進(jìn)方、顧國(guó)浩）；蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇省血液研究所，衛(wèi)生部血栓與止血重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（趙益明、季順東、趙赟霄、阮長(zhǎng)耿）
通訊作者：阮長(zhǎng)耿，電子郵箱： changgengruan@hotmail.com
|
